三代虫染料法荧光定量PCR试剂盒

三代虫染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

检验原理

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，特点如下：

高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应。

高特异性：引物针对三代虫高度保守区设计，避免与其他生物DNA交叉反应。

双重用途：支持定性与定量分析，定量线性范围≥5个数量级。

即开即用：预混优化试剂，减少操作步骤。

运输与保存

运输条件：低温运输（建议冰袋或干冰）。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

自备试剂与仪器

需用户准备：

样品DNA模板

无菌PCR级水（用于稀释）

适用仪器：

ABI系列、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等荧光定量PCR仪。

使用方法

1. 标准曲线制备（以10^1–10^6拷贝/μL为例）

稀释步骤：

标记6管（6–1号），每管加45μL模板稀释液。

6号管加5μL阳性对照（10^7拷贝/μL），震荡混匀，得10^6拷贝/μL标准品。

依次梯度稀释至10^1拷贝/μL（每步更换枪头）。

2. PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积 | 终浓度 |

| 2×预混MasterMix | 10μL | 1× |

| 引物（自备） | 0.2μM each | 0.1–0.5μM |

| 模板DNA | 2μL | — |

| ROX校正染料（可选）| 按仪器要求添加 |

3. 反应程序

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

注意事项

操作分区：试剂配制、样本处理需在不同区域进行，避免污染。

阳性对照：试剂盒提供非传染性DNA片段作为阳性对照，无需活体样本。

数据分析：建议使用仪器配套软件，阈值循环数（Ct值）判定结果。

质量控制

阴性/阳性对照：每批次实验需包含，确保试剂有效性。

重复性：建议每个样本设3个复孔，CV值应<5%。

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