猪呼肠孤病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品特点

即开即用：预混优化试剂，用户仅需提供RNA模板。

高灵敏度与特异性：引物针对病毒高度保守区设计，避免交叉反应。

双重检测功能：支持定量（标准曲线法）和定性（Ct值判读）分析。

内控设计：含阳性对照（非传染性RNA片段），有效排除假阴性。

宽线性范围：定量检测覆盖至少5个数量级（如10²~10⁷拷贝/μL）。

操作流程

试剂准备

所有组分使用前需自然融化，涡旋混匀并短暂离心。

反应液避光保存，避免反复冻融。

标准曲线制备（定量检测适用）

按10倍梯度稀释阳性对照（如10²~10⁷拷贝/μL），独立分区操作以防污染。

标记离心管，依次加入稀释液与模板，每浓度设3复孔。

加样与扩增

反应体系：20μL/孔，含预混液、引物探针、模板RNA。

避免气泡，密封管盖，按以下程序运行：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 2分钟

扩增循环（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）

数据分析

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，且扩增曲线典型；

阴性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需复测，复测Ct<40判为阳性。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域完成，穿戴专用防护用具。

污染控制：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面及仪器。

质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且呈典型扩增曲线。

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