荞麦源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

检测原理

染料法荧光定量PCR通过嵌入DNA双链的荧光染料（如SYBR Green I）实时监测扩增产物。染料与双链DNA结合后发出荧光信号，其强度与PCR产物量成正比，通过分析扩增曲线实现靶序列的定性与定量检测。

试剂盒组成

PCR预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等。

荧光染料：SYBR Green I或其他等效染料。

阳性对照：荞麦源性标准品（已知浓度）。

阴性对照：无荞麦成分的空白对照。

引物混合液：特异性扩增荞麦源性成分的引物。

操作步骤

样本处理：提取待测样本DNA，确保纯度（A260/A280≈1.8-2.0）。

标准品稀释：将阳性对照按梯度稀释（如10^8~10^3 copies/μL），用于标准曲线绘制。

反应体系配制（50 μL体系）：

预混液：25 μL

引物混合液：2 μL

模板DNA：5 μL

无菌水：补足至50 μL

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5 min

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15 s → 60℃ 30 s（荧光采集）

数据分析：

根据标准曲线计算样本中荞麦源性成分的拷贝数。

阈值循环数（Ct值）≤35判定为阳性。

性能参数

灵敏度：最低检测限为2×10^3 copies/mL。

特异性：与常见谷物（小麦、大麦等）无交叉反应。

重复性：批内/批间变异系数（CV）≤5%。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免DNA污染。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

不同仪器需优化扩增参数，建议使用ABI 7500或等效设备。

应用范围

适用于食品真实性鉴定、过敏原检测及科研实验中荞麦成分的分子检测。

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