金枪鱼源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于金枪鱼源性成分的快速、高灵敏度检测。适用于生鲜金枪鱼、深加工产品及混合样本中金枪鱼物种的特异性鉴定，符合农业农村部标准SC/T 3062-2025的技术要求。

检测原理

采用SYBR Green I荧光染料，通过实时监测PCR扩增过程中荧光信号的变化，结合特异性引物对靶标DNA片段进行定量分析。扩增曲线与熔解曲线双重判读，确保结果准确性。

试剂盒组成

预混液：SYBR Premix EX Taq（2×）

引物混合液：金枪鱼物种特异性引物（正向/反向，10 μmol/L）

阴性对照：无核酸酶水

阳性对照：金枪鱼基因组DNA（标准品）

DNA提取试剂（可选）：裂解缓冲液、蛋白酶K等

操作步骤

1. DNA提取

按标准方法提取样本DNA，建议浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.7~2.0。

2. PCR反应体系配制（20 μL体系）

| 成分 | 体积（μL） |

| SYBR Premix EX Taq | 10 |

| 正向引物（10 μmol/L） | 0.4 |

| 反向引物（10 μmol/L） | 0.4 |

| DNA模板 | 1 |

| 无核酸酶水 | 补至20 |

3. PCR扩增程序

预变性：95°C，5 min

循环阶段（40 cycles）：95°C 10 s → 60°C 30 s（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60°C~95°C，每0.5°C升温5 s

结果判读

阳性判定：Ct值≤35且熔解曲线峰值与阳性对照一致。

阴性判定：无扩增曲线或Ct值>40。

质控要求：阴性对照无信号，阳性对照Ct值在预期范围内。

注意事项

避免试剂反复冻融，预混液需避光保存。

操作中需严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区）以防止污染。

若样本为深加工产品，建议增加DNA纯化步骤以提高检出率。

性能参数

检测限：0.1%金枪鱼成分（w/w）

特异性：与常见鱼类（如鲣鱼、鲭鱼）无交叉反应

适用样本：肌肉组织、罐头制品、鱼糜等

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