禽肾炎病毒2型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

禽肾炎病毒2型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

试剂盒组成

2×qPCR Magic Mix：500 μL（棕色管，含预混荧光染料）

荧光PCR专用模板稀释液：1 mL（黄盖）

禽肾炎病毒2型qPCR引物混合液：100 μL（白盖，特异性引物）

阳性对照：1管（病毒基因组标准品）

阴性对照：无核酸酶水

性能特点

高灵敏度：采用荧光定量PCR技术，检测限低至10拷贝/μL。

特异性强：引物针对ANV-2保守区设计，避免与其他微生物交叉反应。

操作简便：一管式闭管操作，减少污染风险，支持“即开即用”。

稳定性高：预混试剂优化反应体系，重复性良好。

通量适配：每盒可完成50次20μL反应。

实验步骤

1. 样品RNA制备

样本数（N）需额外设置阳性对照（PC）和阴性对照（NC），总计提取N+2个RNA样本。

推荐使用柱式病毒RNA提取试剂（兼容市售多数）。

PC建议采用10μL阳性对照的1000倍稀释液，NC使用无核酸酶水。

2. RT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（N+2） | RT-PCR阴性对照 | RT-PCR阳性对照 |

| 5×双酶一管式RT-PCR Buffer | 4 μL | 4 μL | 4 μL |

| 引物混合液 | 2 μL | 2 μL | 2 μL |

| 模板RNA | 2 μL | - | 2 μL（阳性对照）|

| 无核酸酶水 | 补足至20 μL | 补足至20 μL | 补足至20 μL |

3. 扩增程序

逆转录：50℃ 15分钟 → 预变性：95℃ 5分钟 → 循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

注意事项

实验前需分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

阳性对照需与待测样本分装于不同批次，防止假阳性。

反应体系需避光配制，荧光染料对光敏感。

质量控制

阴性对照：应无扩增曲线（Ct值≥40或无信号）。

阳性对照：Ct值需≤30，否则需重复实验。

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