人白介素23(IL-23)ELISA试剂盒

一、技术原理与核心特性：

高特异性检测系统：

异源二聚体识别：采用抗IL-23p19亚基单抗（克隆eBio473）作为捕获抗体，结合生物素化抗IL-12p40抗体（克隆C8.6）实现完整异源二聚体检测

活性形式区分：通过pH梯度洗脱可选择性检测游离IL-23与可溶性受体复合物

抗干扰优化：特殊缓冲液消除IL-12和IL-27的交叉反应（验证交叉率<0.01%）

2025年技术突破：

新增单分子阵列（Simoa）检测模式（灵敏度达0.005 pg/mL）

标准品溯源至WHO国际标准（NIBSC 18/236）

微孔板采用石墨烯量子点涂层（批内CV降至2.5%）

试剂盒配置与关键参数

标准组件清单：

预包被96孔板（12条×8孔独立包装，充氩气保存）

重组人IL-23标准品（7梯度：0.1-200 pg/mL，含NIST可溯源证书）

检测系统：

链霉亲和素-ALP复合物（4℃稳定9个月）

CSPD化学发光底物（信号持续6小时）

专用组织保存液（含RNase抑制剂）

性能指标：

参数  规格  临床意义

检测范围  0.1-200 pg/mL  覆盖生理和病理浓度

灵敏度  0.03 pg/mL（LLOQ）  可检测早期炎症反应

精密度  板内CV<4%，板间CV<7%  满足CAP认证要求

特异性  与IL-12交叉反应<0.01%  确保检测特异性

实验操作标准化流程

样本处理规范：

血清/血浆：推荐使用EDTA抗凝（肝素可能干扰检测）

稳定性数据：

室温：≤1小时（需立即处理）

-80℃：≤18个月（避免反复冻融>2次）

特殊样本：

组织匀浆需添加1%蛋白酶抑制剂

细胞培养上清需离心去除碎片

优化操作步骤：

预冷离心：4℃ 3000×g离心15分钟

加样策略：采用棋盘式加样顺序

关键孵育：37℃恒温振荡（700rpm）80分钟

信号检测：化学发光读数（积分时间400ms）

临床应用与科研价值

疾病诊断临界值：

银屑病活动期：血清>25 pg/mL（敏感性92%，特异性88%）

炎症性肠病：肠黏膜组织>50 pg/mL预示生物制剂耐药

肿瘤免疫治疗：治疗前>15 pg/mL与PD-1抑制剂疗效正相关

2025年研究前沿：

发现IL-23通过JAK2-STAT3/RORγt通路调控Treg/Th17平衡

抗IL-23p19单抗（Mirikizumab）获批新适应症

空间多组学揭示银屑病皮损中IL-23的空间异质性

质量控制与问题处理

质控标准：

标准曲线要求：5参数拟合R2≥0.996

必检参数：

空白OD值<0.1

质控品回收率93-107%

故障排除指南：

问题现象  根本原因  专业处理

标准曲线异常  标准品复溶不完全  超声处理3分钟+37℃孵育

信号饱和  样本未稀释  建议预实验确定稀释倍数

板间差异大  孵育湿度不足  使用带湿度控制的孵育箱

公司正在出售的产品：

常见问题与避坑指南：

环节   风险点   避坑建议

试剂使用   混用   严禁混用不同品牌或不同批号的试剂盒组分（如A品牌的包被板+B品牌的酶标二抗），这会导致反应体系崩溃。

终止反应   顺序   加入终止液后，溶液由蓝变黄。此时应尽快读数，因为颜色可能会随时间轻微变化。

保存   剩余板条   未用完的酶标板条，需立即密封，放入自封袋中并加干燥剂，保存于 2-8℃，避免受潮和反复冻融。

环境   污染   避免试剂接触漂白剂或含漂白剂的物质，它们会破坏酶的活性，导致实验失败。

建议： 

在购买前，务必查看说明书中的“交叉反应”列表和“样本类型”说明。如果说明书宣称特异性极高（如CR0.1%），

但在你的实际样本中出现了大量假阳性，那可能需要优化洗涤步骤，或者考虑更换抗体特异性更强的试剂盒。