致泻性大肠杆菌（致泻性大肠埃希氏菌）通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I嵌合荧光染料技术，专用于致泻性大肠杆菌（EPEC、ETEC、EIEC、EHEC等）的快速、高灵敏度检测。通过一步法实时荧光定量PCR（qPCR）实现靶标基因的扩增与定量分析，适用于食品、临床样本及环境样本中的病原体筛查。

产品组分

| 组分编号 | 组分名称 | 规格 |

| A | 2× qPCR Master Mix（含SYBR Green I） | 250 μL/管 |

| B | 耐热逆转录酶 & HotStart Taq Mix | 20 μL/管 |

| C | RNase-free H2O | 250 μL/管 |

| D | 阳性对照（致泻性大肠杆菌特异性基因片段） | 50 μL/管 |

| E | 阴性对照（无核酸水） | 50 μL/管 |

保存条件

-20℃避光保存，有效期24个月；避免反复冻融。短期使用可置于4℃保存3个月。

检测原理

SYBR Green I染料法：与双链DNA结合后发射荧光信号，实时监测扩增进程。

一步法RT-qPCR：整合逆转录与定量扩增，减少操作步骤与污染风险。

高特异性引物：针对致泻性大肠杆菌保守基因区域设计，避免交叉反应。

性能参数

灵敏度：可检测低至0.1 pg RNA或单拷贝DNA模板。

重复性：复孔间Ct值差异≤0.5。

适用性：兼容常见qPCR仪器（无ROX/Low/High ROX平台）。

操作流程

样本处理：

粪便/食品样本：按标准方法提取核酸。

临床样本（血液/病灶分泌物）：使用无菌抗凝管采集，提取总RNA/DNA。

反应体系配制（20 μL/反应）：

2× Master Mix 10 μL

引物混合液 2 μL

模板 2 μL

RNase-free H2O 补至20 μL

扩增程序：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）

熔解曲线分析：60℃~95℃，升温速率0.5℃/秒

注意事项

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

阳性对照需独立分区操作，避免污染。

熔解曲线需呈现单一峰形，否则提示非特异性扩增。

质量控制

阳性对照：Ct值≤30，熔解曲线峰值与预期一致。

阴性对照：无扩增信号（Ct值≥40）。

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