人线粒体DNA 染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于双色荧光定量PCR技术（FAM/HEX通道），专为人细胞基因组DNA及血清/血浆游离线粒体DNA（mtDNA）拷贝数绝对定量设计。通过同步检测线粒体基因与核基因内参，实现高灵敏度、高重复性的mtDNA拷贝数分析，适用于衰老研究、肿瘤液体活检及代谢性疾病等领域。

技术特点

双色荧光同步检测

采用FAM标记mtDNA靶标基因，HEX标记核基因内参（如β-actin），单孔完成双基因扩增，减少样本消耗与操作误差。

绝对定量标准品

配套已知拷贝数的标准品A与校正品B，通过双标准曲线校正批次差异，确保结果准确性。

广泛样本兼容性

适配细胞gDNA（≥10 ng/μL）、血清/血浆游离DNA（建议≥50 μL样本量）。

严格质控标准

GMP级生产，每批次均通过扩增效率（95–105%）、重复性（CV < 3%）及线性范围（10¹–10⁶拷贝）验证。

操作流程

1. 样本制备

细胞gDNA：使用常规DNA提取试剂盒提取，浓度调整至10 ng/μL。

血清/血浆游离DNA：EDTA抗凝全血需在30分钟内离心分离，提取后立即检测或-80℃保存。

2. PCR反应体系

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混液 | 18 |

| 模板DNA | 2（10 ng） |

| 总体系 | 20 |

建议设置技术重复（≥3孔）及阴性对照（NTC）。

3. 扩增程序

预变性：95℃ 2分钟

循环（40轮）：95℃ 15秒 → 56℃ 1分钟（荧光采集） → 72℃ 30秒

终延伸：72℃ 5分钟

数据分析

标准曲线生成：

使用标准品A（梯度稀释）生成mtDNA与内参基因的标准曲线。

批次校正：

通过校正品B计算K2系数，修正仪器与试剂差异。

拷贝数计算：

将样本Ct值代入标准曲线方程，输出每微克DNA或每毫升血清中的mtDNA绝对拷贝数。

性能参数

灵敏度：最低检测限10拷贝/反应

特异性：无非特异性扩增（熔解曲线单峰）

适用仪器：ABI 7500、QuantStudio系列、Roche LightCycler等主流qPCR仪

注意事项

避免反复冻融试剂，解冻后需冰上保存并在24小时内使用。

实验全程使用RNase-free耗材，防止核酸污染。

若样本Ct值超出线性范围，建议稀释后重新检测。

存储条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

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