肺炎支原体/肺炎衣原体双重染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于双重染料法荧光定量PCR技术，针对肺炎支原体（MP）和肺炎衣原体的特异性保守基因区域设计引物及探针，通过实时荧光信号检测实现对病原体核酸的高灵敏度扩增与定量分析。试剂盒适用于临床样本的病原学诊断，分析灵敏度可达100拷贝/反应，线性范围覆盖至少5个数量级，且特异性强，可有效避免与其他微生物的交叉反应。

试剂组成

反应液：500μL×2管（含优化引物及探针）

酶液：50μL×1管（热启动Taq酶等）

阳性质控品：50μL×1管（用于验证试剂有效性）

阴性质控品：250μL×1管（排除污染干扰）

规格：50T/盒（每反应体系20μL）

储存与运输

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（建议不超过5次）。

有效期：12个月（生产日期见包装标签）。

运输要求：低温运输，确保干冰或冰袋维持-20℃环境。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500

安捷伦MX3000P/3005P

Roche LightCycler

Bio-Rad CFX系列

Eppendorf Mastercycler ep realplex

样本要求

采集类型：咽拭子（优先采集咽后壁及扁桃体分泌物，避免接触舌部）。

保存与运输：采样后立即置于专用保存管中密封，4℃暂存（≤24小时）或-70℃长期保存。

DNA提取：需使用配套或经验证的核酸提取试剂盒，确保DNA纯度（A260/A280比值1.8-2.0）。

操作流程

反应体系配制：按说明书比例混合反应液、酶液及样本DNA。

PCR程序设置：

预变性：95℃ 5分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集荧光信号）

结果判读：

阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型；

阴性：无扩增曲线或Ct值>38（需结合阴性质控品确认）。

注意事项

不同批号试剂不可混用。

实验需在符合生物安全标准的实验室进行，避免气溶胶污染。

若需定量分析，建议使用标准品建立标准曲线。

局限性

检测结果需结合临床表现及其他实验室指标综合判断。

极低病毒载量样本（<100拷贝/反应）可能存在假阴性风险。

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