染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

染料法荧光定量RT-PCR试剂盒基于SYBR Green I嵌合荧光染料，通过一步法实现反转录（RT）与实时定量PCR（qPCR）的同步进行。该技术适用于RNA或DNA模板的高灵敏度检测，广泛应用于基因表达分析、病原体检测及微生物定量等领域。

核心组分

2×预混缓冲液：含优化的反应体系及dNTPs，支持高效逆转录与扩增。

酶混合液：整合耐热逆转录酶及热启动Taq DNA聚合酶，确保高特异性和扩增效率。

无核酸酶水：用于反应体系配制。

阳性对照（部分试剂盒提供）：用于验证实验有效性，避免假阴性。

技术参数

灵敏度：RNA检测下限达0.1 pg（高表达靶标），DNA可检测单拷贝。

动态范围：可分辨2倍浓度差异的模板。

稳定性：预混液在4℃下可稳定保存24小时。

兼容性：适配主流荧光定量仪器（No/Low/High Rox平台）。

操作流程

模板制备：提取RNA/DNA，建议使用配套核酸释放剂或兼容提取试剂盒。

反应体系配制：按比例混合预混液、酶、引物及模板（如20 μL体系含10 μL 2×缓冲液、0.5 μL酶、1 μL引物、1 μL模板，补水至终体积）。

程序设置：

逆转录：50℃ 10-30分钟（RNA模板需此步骤）。

预变性：95℃ 2-5分钟。

扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环），熔解曲线分析（可选）。

注意事项

防污染：建议在超净台或使用带滤芯枪头操作。

引物设计：需确保特异性，避免引物二聚体干扰。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

应用示例

细胞基因表达分析：以293T细胞总RNA为模板，可稳定扩增不同GC含量靶标。

病原体检测：如病毒RNA（灵敏度达E2拷贝数）或克氏锥虫DNA。

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