猪霍乱病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

猪霍乱病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于实时荧光RT-PCR技术，定性检测猪霍乱病毒（CSFV）核酸，适用于临床样本（如血液、组织脏器、肠内容物）的病原学诊断及流行病学监测。

检测原理

针对CSFV基因组保守区域设计特异性引物和探针，通过逆转录（RT）将病毒RNA转化为cDNA，随后进行荧光定量PCR扩增。反应过程中探针与靶序列结合释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定性分析。

试剂盒组成

RT-PCR反应液（冻干粉或预混液，复溶后反应体系≥25μL/反应）

逆转录酶混合液

阳性对照（含CSFV靶基因的质粒或灭活病毒）

阴性对照（灭菌纯水）

复溶剂（如适用）

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/QuantStudio系列

Bio-Rad CFX系列

Roche LightCycler 480

杭州博日、安捷伦MX系列等

样本要求

样本类型：血清、空肠内容物、淋巴结、脾脏等组织。

采集与处理：

血清：无菌采集静脉血2-3 mL，分离血清后密闭送检。

组织：取1 g组织匀浆后置于PBS中，离心取上清。

肠内容物：1 g样本与1 mL PBS混合，离心后取上清。

运输与保存：2-8℃短期保存（≤24小时），-70℃长期保存，避免反复冻融。

检测流程

核酸提取：使用配套或通用RNA提取试剂盒。

反应体系配制：按说明书比例混合反应液、酶及模板RNA。

PCR程序：

50℃逆转录10分钟（如未预混逆转录酶）；

95℃预变性2分钟；

95℃ 10秒→60℃ 35秒，共40个循环（60℃采集荧光信号）。

性能参数

灵敏度：≤1000 copies/mL。

特异性：与猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪瘟相关病毒无交叉反应。

重复性：批内/批间CT值变异系数（CV）<3%。

结果判读

阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型；

阴性：无Ct值或Ct值>40。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需充分混匀，短暂离心后使用。

废弃物质按生物危害品处理。

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