马源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

马源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品基本信息

保存条件：-20℃避光保存

检测方法：染料法荧光定量PCR

种属反应性：特异性针对马源性成分，引物设计基于高度保守区，避免与其他物种DNA交叉反应。

规格：50次/盒（20μL反应体系）

用途：仅限定性检测，不可用于定量分析。

产品特点

即开即用：用户仅需提供待测DNA模板。

内置对照：含阳性对照（非活体DNA片段），便于区分假阴性结果。

高特异性：优化引物设计，确保仅与马源性DNA靶标结合。

便捷电泳：预混上样染料，PCR产物可直接用于电泳分析。

操作步骤

试剂准备

解冻与混匀：

从-20℃取出试剂盒，置于冰上缓慢解冻（5-10分钟）。

解冻后轻弹管壁混匀，避免涡旋或剧烈震荡。短暂离心（1000 rpm，5秒）收集液体。

阳性对照稀释（若需标准曲线）：

按10倍梯度稀释阳性对照（10E2-10E7拷贝/μL），使用独立区域操作以防污染。

反应体系配置（20μL/反应）

建议体系：

模板DNA：2-5 μL

PCR预混液：10 μL（含染料、酶、dNTPs等）

引物混合液：2 μL

无菌水：补足至20 μL

阴性对照：以无菌水替代模板DNA。

PCR程序设置

预变性：95℃, 3分钟

循环阶段（40-45 cycles）：

变性：95℃, 15秒

退火/延伸：60℃, 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析（可选）：60℃升至95℃，每0.5℃停留5秒。

注意事项

防污染措施：

分装试剂，避免反复冻融。

操作区与扩增区物理隔离，使用带滤芯枪头。

质量控制：

每批次实验需包含阴性对照（NTC）和阳性对照。

若Ct值＞35或熔解曲线异常，需重复实验。

数据解读：

阳性判定：Ct值≤阈值且熔解峰单一。

阴性判定：无Ct值或熔解峰与阳性对照不符。

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