鹅星状病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对鹅星状病毒（GAstV）基因组高度保守区域设计特异性引物。通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，结合标准曲线实现病毒核酸的定性和定量分析。

试剂盒组成

2×qPCR Magic Mix：预混含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲液（500 μL，棕色管）。

荧光PCR专用模板稀释液：用于样本核酸稀释（1 mL，黄盖）。

GAstV特异性引物混合液：靶向1型/2型鹅星状病毒（100 μL，白盖）。

阳性对照：1×10^8 拷贝/μL的GAstV核酸（50 μL，黄盖）。

性能参数

特异性：引物经生物信息学验证，仅对GAstV 1型/2型有效扩增。

灵敏度：最低检测限为10拷贝/μL（优于常规PCR）。

重复性：批内/批间变异系数（CV）≤5%。

标准曲线：

1型GAstV：Ct = -3.052×log(拷贝数) + 40.939

2型GAstV：Ct = -3.185×log(拷贝数) + 40.614

操作步骤

样本处理：按标准方法提取样本RNA/DNA，用稀释液调整浓度。

反应体系配制：每20μL反应含10μL 2×Mix、2μL引物、2μL模板、6μL无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 3分钟

40循环：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）

数据分析：根据扩增曲线和Ct值判定结果，通过标准曲线计算病毒载量。

注意事项

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

质量控制：每批次实验需包含阴性对照（无模板）和阳性对照。

交叉污染防控：建议在超净台或PCR工作站中操作。

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