肉毒梭状芽孢杆菌E型外毒素基因染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于荧光定量PCR技术（染料法），专用于检测肉毒梭状芽孢杆菌E型（Clostridium botulinum type E）外毒素基因。通过特异性引物及荧光染料对靶标DNA进行高灵敏度扩增和定量分析，适用于科研、食品安全及临床病原学诊断等领域。

产品参数

规格：50T/盒（可根据需求提供25T/50T包装）

检测方法：染料法荧光定量PCR

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶标核酸

适用样本：水样、粪便、食品及环境样本等

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月

适配仪器：ABI系列、Bio-Rad系列、Roche LightCycler等主流荧光定量PCR仪

试剂盒组成

| 组分 | 25T/盒规格 | 50T/盒规格 |

| PCR反应液 | 500 μL×1管 | 1000 μL×1管 |

| 阳性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |

| 阴性对照 | 40 μL×1管 | 40 μL×1管 |

| 说明书 | 1份 | 1份 |

注意：不同批号组分不可混用，避免反复冻融。

实验流程

样本处理：按标准方法提取待测样本DNA。

试剂配制：

计算反应数（n=样本数+阴阳性对照+误差预留）。

按20 μL/反应分装PCR反应液至八联管。

加样：加入5 μL模板DNA至反应管，阴性对照以无核酸水替代。

PCR扩增：

预变性：95℃ 5 min；

循环参数：95℃ 10 sec → 60℃ 30 sec（40循环，荧光信号采集）。

结果分析：根据Ct值及标准曲线判定样本中靶标基因含量。

质量控制

阳性对照：应出现典型扩增曲线，Ct值≤30。

阴性对照：无扩增信号（Ct值≥40或无Ct值）。

重复性：同一样本三次重复检测Ct值变异系数（CV）≤5%。

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

试剂解冻后需涡旋混匀并瞬时离心。

若检测环境存在RNase污染风险，建议使用RNase抑制剂。

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