结肠弯曲杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光PCR技术，针对结肠弯曲杆菌（Campylobacter coli）基因高度保守区域设计特异性引物。通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性或定量分析：

定性检测：通过Ct值判定阳性/阴性（阈值：Ct≤35为阳性，Ct≥40为阴性，35<Ct<40需复测）。

定量检测：通过标准曲线（阳性对照log浓度与Ct值）计算待测样本DNA拷贝数，线性范围≥5个数量级。

试剂组成

扩增预混液：含SYBR Green荧光染料、dNTPs、耐热DNA聚合酶及优化缓冲体系。

引物混合液：结肠弯曲杆菌特异性引物对。

阳性对照：已知浓度的结肠弯曲杆菌DNA片段。

阴性对照：无核酸酶水。

自备材料

样本DNA：需用户自行提取并确保纯度（A260/A280≈1.8-2.0）。

仪器：兼容ABI系列、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等荧光定量PCR仪。

操作步骤

反应体系配制（20μL/反应）：

扩增预混液：10μL

引物混合液：2μL

模板DNA：2μL（建议浓度10-100 ng/μL）

无核酸酶水：补足至20μL

（阴性/阳性对照需同步设置）

PCR程序：

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）

熔解曲线分析：60℃至95℃，升温速率0.5℃/秒

结果判读

定性：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且扩增曲线典型；待测样本Ct≤35判为阳性。

定量：根据标准曲线计算样本浓度（拷贝数/μL）。

注意事项

避免反复冻融试剂，分装后使用。

操作需在无菌环境下进行，防止交叉污染。

熔解曲线应呈现单一峰，非特异性扩增需重新优化条件。

公司正在出售的产品