幽门弯曲杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

技术原理

本试剂盒基于SYBR Green I染料法荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增幽门弯曲杆菌保守基因序列（如23S rRNA或gyrB基因）。PCR扩增过程中，染料与双链DNA结合释放荧光信号，仪器实时监测荧光强度，通过Ct值（循环阈值）实现目标基因的定量检测。

核心性能参数

灵敏度：最低检测限达100拷贝/反应。

特异性：引物针对幽门弯曲杆菌高度保守区设计，与空肠弯曲杆菌等近缘菌无交叉反应。

线性范围：定量检测时覆盖5个数量级（10²–10⁷拷贝/μL）。

防污染设计：含dUTP/UNG酶系统（部分型号），可降解既往扩增产物，减少假阳性风险。

试剂盒组成

| 成分 | 规格（50次） | 功能描述 |

| 2×qPCR预混液 | 1 mL | 含DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺ |

| 幽门弯曲杆菌引物混合液 | 100 μL | 特异性引物对 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 定量标准品 |

| 阴性对照（超纯水） | 1 mL | 污染监控 |

| 荧光染料（SYBR Green I） | 50 μL | 信号检测 |

操作流程

样本DNA提取

推荐使用商品化DNA提取试剂盒（如磁珠法），确保纯度（A260/A280≈1.8–2.0）。

粗提方法：沸水浴裂解10分钟，离心取上清。

反应体系配制（20μL）

2×qPCR预混液     10 μL  

引物混合液        2 μL  

模板DNA          2–5 μL（≤200 ng）  

超纯水           补足至20 μL  

PCR扩增程序（以ABI 7500为例）

95℃预变性 10分钟 → 40循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光） → 熔解曲线分析（60–95℃）。

质量控制

阳性对照：Ct值≤30表明试剂有效。

阴性对照：无扩增曲线（Ct值≥40或无信号）。

熔解曲线：单一峰确保扩增特异性。

运输与储存

运输条件：低温（-20℃）避光运输，干冰或冰袋保温。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月，避免反复冻融（≤3次）。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，防止气溶胶污染。

定量分析需绘制标准曲线（建议使用10倍梯度稀释阳性对照）。

本产品仅限科研用途，临床诊断需经当地法规认证。

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