牛附红细胞体（牛嗜血支原体）染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于检测牛附红细胞体（Eperythrozoon wenyoni，又称牛嗜血支原体）的核酸。适用于科研及临床样本的定性或定量分析，具有高灵敏度、高特异性和操作简便的特点。

产品特点

即开即用：用户仅需提供待测DNA模板，试剂盒包含预混反应体系，无需额外优化。

高灵敏度与特异性：引物及探针针对牛附红细胞体保守序列设计，可有效避免与其他病原体的交叉反应。

双重检测模式：支持定性和定量分析，定量线性范围达5个数量级。

质量控制：提供阳性质控品和阴性质控品，便于结果判读及排除假阴性。

兼容性广：适配主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX、LightCycler480等）。

试剂盒组成

预混PCR反应液（含染料、dNTPs、酶等）

阳性质控品（标准曲线模板）

阴性质控品（无核酸水）

复溶剂（冻干粉试剂适用）

操作步骤

1. 样本制备

使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

2. 反应体系配制（20 μL体系）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混PCR反应液 | 15 |

| 模板DNA | 5 |

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃, 2 min | 1 |

| 变性 | 95℃, 10 s | 45 |

| 退火/延伸 | 60℃, 35 s | |

注：荧光信号采集设置为60℃延伸阶段（FAM通道）。

4. 数据分析

定量检测：以阳性质控品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

定性检测：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

注意事项

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；避免反复冻融。

防污染措施：分区操作（样本制备区、扩增区），使用无菌耗材。

仪器适配：若使用ABI 7500等需ROX校正的仪器，需按说明书添加对照染料。

适用范围

科研用途：流行病学调查、病原载量监测。

临床辅助诊断：疑似感染病例的病原学确认。

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