犬附红细胞体（犬嗜血支原体）染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品用途

用于特异性检测犬附红细胞体（犬嗜血支原体）的核酸，适用于科研领域，不用于临床诊断。

技术原理

基于荧光定量PCR技术，通过特异性引物和荧光染料（如SYBR Green）对目标DNA进行扩增和实时检测，结合标准曲线实现定量分析。

产品特点

高特异性：引物经优化设计，仅扩增目标病原体，无交叉反应。

灵敏度高：可检测低拷贝数模板，检测限通常为10^1–10^2 copies/μL。

快速便捷：预混反应体系（含染料、酶、dNTPs等），用户仅需提供DNA模板。

内控设计：提供阳性对照（Ct值≤35）和阴性对照（Ct=40或无Ct值），确保结果可靠性。

兼容性：支持常见荧光定量PCR仪（如ABI、Bio-Rad等）。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。

运输方式：低温冷链运输，确保试剂稳定性。

实验步骤

样本处理：提取待测样本DNA，建议使用柱式核酸提取试剂盒。

反应体系配制：

按说明书比例混合预混液、引物、模板DNA及无核酸酶水。

推荐反应体积：20–50 μL/反应。

PCR程序设置：

预变性：95℃ 2–5分钟；

扩增循环（40–45次）：95℃ 10–30秒 → 退火（温度依引物设计）→ 72℃延伸；

荧光信号采集：在延伸步骤结束后进行。

结果分析：

基线设定：选择指数扩增前稳定信号区域（通常6–15循环）。

阈值设定：高于阴性对照荧光峰值。

判读标准：

阳性：Ct值＜38，且有明显指数扩增曲线；

可疑：38≤Ct＜40，需复测确认；

阴性：Ct≥40或无扩增曲线。

注意事项

实验需在无污染环境下操作，建议使用超净工作台和防气溶胶吸头。

避免试剂反复冻融，分装保存可延长稳定性。

阳性对照需单独存放，防止污染其他试剂。

若出现非特异性扩增，可优化退火温度或重新设计引物。

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