水泡性口炎病毒新泽西型染料法荧光定量RT-PCR剂盒 新品

产品用途

用于定性或定量检测水泡性口炎病毒新泽西型RNA，适用于临床样本、动物组织或培养物的病毒检测。

技术原理

染料法荧光定量RT-PCR：采用特异性引物扩增VSV-NJ的L基因保守区，通过荧光染料（如SYBR Green）与双链DNA结合产生信号，实时监测扩增曲线。

高灵敏度与特异性：引物针对VSV-NJ基因高度保守区域设计，分析灵敏度可达100拷贝/反应，可区分新泽西型与印第安纳型（VSV-IND）。

主要组分

RT-PCR预混液（含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs等）

特异性引物对

阳性对照（VSV-NJ RNA标准品）

阴性对照（无核酸酶水）

荧光染料

操作步骤

样本处理：提取待测样本RNA，建议使用配套RNA提取试剂盒。

反应体系配制：按比例混合预混液、引物、荧光染料及模板RNA。

扩增程序：

逆转录：50℃ 15-30分钟

预变性：95℃ 2-5分钟

循环阶段（40-45轮）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

结果分析：

通过阈值循环数（Ct值）定量，标准曲线法计算病毒载量。

定性检测时，Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

性能参数

灵敏度：100拷贝/反应

线性范围：10^1-10^6拷贝/μL（定量检测）

重复性：批内与批间变异系数（CV）<5%

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96、LightCycler 480等）。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输条件：低温干冰运输。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免RNA降解。

阳性对照需与待测样本分区域处理，防止污染。

若需定量，建议每次实验均运行标准品曲线。

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