高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒用于检测高致病猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型变异株（HP-PRRSV）的核酸，适用于科研领域对猪群感染的辅助诊断，检测结果需结合其他临床指标综合判断。不适用于临床治疗或个体诊断。

检验原理

技术方法：采用TaqMan探针法或SYBR Green染料法（视具体型号而定），针对HP-PRRSV基因保守区域设计特异性引物及探针。

荧光信号：在PCR扩增过程中，探针或染料与目标DNA结合释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现核酸的定性与定量分析。

特点：高灵敏度（可检测低至10拷贝/μL的病毒核酸）、强特异性（不与猪其他常见病原体交叉反应）。

储存条件及有效期

储存：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（建议分装，冻融次数≤7次）。

有效期：12个月。

试剂盒组分

（以50T/盒为例，具体以实际包装清单为准）

荧光PCR反应液（含dNTPs、缓冲液等）

逆转录酶、Taq DNA聚合酶混合液

阳性对照（人工合成DNA片段）

阴性对照（无核酸酶水）

使用说明书

操作步骤

1. 试剂准备区

将各组分完全解冻后混匀，按表1配制PCR-Mix（示例）：

| 试剂 | 体积/反应 |

| PCR反应液 | 19 μL |

| 酶混合液 | 1 μL |

2. 样本处理区

使用商业化核酸提取试剂提取样本RNA，建议-70℃保存待测。

每反应管加入5 μL模板（阴性对照、待测样本、阳性对照分别加样）。

3. 扩增区

按以下程序设置荧光PCR仪（示例）：

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ 10 min | 1 |

| 预变性 | 95℃ 3 min | 1 |

| 扩增 | 95℃ 15 s → 60℃ 30 s | 40 |

结果判读

阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈典型S型。

可疑：Ct值35-40，建议重复检测。

阴性：无扩增曲线或Ct值≥40。

注意事项

实验需在PCR分区实验室进行，避免污染。

试剂开封后需尽快使用，避免反复冻融。

阳性对照仅限科研使用，不可用于临床样本。

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