猪生殖与呼吸综合症病毒美洲型NADC31株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

运输与储存

运输条件：泡沫箱加冰密封运输，确保低温环境。

储存要求：试剂盒组分需避光保存，使用前自然融化并充分混匀，短暂离心后使用。

自备试剂与耗材

样本DNA/RNA提取物

一次性吸头、无菌离心管、专用工作服及手套

荧光定量PCR仪（兼容FAM通道）

操作步骤

样本处理区

提取待测样本核酸，同时设置阳性质控品和阴性质控品（各取5μL）。

避免交叉污染，分区操作（样本处理、试剂配制、加样需独立进行）。

反应体系配制

将核酸样本加入预混反应液中，盖紧管盖，短暂离心混匀。

反应体系推荐体积：25μL（具体可根据仪器优化）。

PCR扩增程序

预变性：92℃ 5分钟  

PCR循环（30个循环）：  

- 94℃ 60秒  

- 50℃ 60秒  

- 72℃ 60秒（荧光信号收集步骤）  

仪器设置：检测通道选择FAM，参比荧光选NONE。

结果分析

基线（Baseline）调节：根据曲线倾斜度调整Start值（3~15）、Stop值（5~20）。

阈值（Threshold）设定：高于阴性对照的荧光信号线。

注意事项

严格按分区操作，避免气溶胶污染。

反应液需避光保存，加样时避免气泡。

实验后清洁：使用10%次氯酸、75%酒精或紫外灯处理工作台及移液器。

所有废弃物按《微生物生物医学实验室生物安全通则》处置。

性能参数

特异性：针对NADC31株设计，避免与其他PRRSV亚型交叉反应。

灵敏度：可检测低至10^2拷贝/μL的病毒核酸。

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