小反刍兽疫病毒野毒株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

检验原理

本试剂盒采用TaqMan探针法实时荧光RT-PCR技术，针对小反刍兽疫病毒野毒株的高度保守基因区域设计特异性引物和荧光探针。通过逆转录（RT）和聚合酶链式反应（PCR）对病毒核酸进行体外扩增，利用荧光信号实时监测扩增过程，实现病原体的定性检测。

试剂组成

反应液：含RT-PCR缓冲体系、dNTPs、Mg²⁺等（25T/盒：500μL×1管；50T/盒：500μL×2管）。

酶混合液：含逆转录酶、Taq DNA聚合酶等（25T/盒：25μL×1管；50T/盒：50μL×1管）。

阳性质控品：灭活的小反刍兽疫病毒cDNA（250μL×1管）。

阴性质控品：偶蹄兽类基因组DNA（250μL×1管）。

说明书：1份。

注意：不同批号试剂组分不可混用。

操作步骤

样本处理：提取待检样本RNA，避免降解。

反应体系配制：按比例混合反应液、酶液及模板RNA，阴/阳对照需同步设置。

荧光PCR扩增：

逆转录：50℃ 10-30分钟（视酶特性调整）。

预变性：95℃ 3-5分钟。

扩增循环：95℃ 15秒→60℃ 30-60秒（40-45个循环），采集FAM通道荧光信号。

结果分析：

阈值设定：以基线信号标准偏差的10倍为阈值（或仪器自动分析）。

判读标准：Ct值≤35且扩增曲线呈“S”形为阳性；无扩增曲线为阴性。

储存条件及有效期

-20℃以下避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/QuantStudio系列

Bio-Rad CFX系列

Roche LightCycler 480

杭州博日系列等

注意事项

实验需在符合生物安全要求的实验室进行。

试剂解冻后需彻底混匀并短暂离心。

避免交叉污染，建议使用UDG酶防污染系统。

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