甲型流感（禽流感）病毒N3亚型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，针对甲型流感病毒N3亚型的基因保守区域设计特异性引物及探针。通过荧光信号实时监测扩增过程，实现对病毒核酸的定性及定量分析。反应体系中若存在目标核酸模板，PCR扩增将释放荧光信号，仪器通过检测信号强度输出结果。

样本要求

样本类型：鼻咽拭子、喉拭子或呼吸道分泌物。

采集与保存：

使用无菌拭子采集样本后，立即置于病毒运输培养基（含抗生素和稳定剂）。

短期保存需2-8℃冷藏（72小时内检测），长期保存应置于-70℃以下。

灭活处理：建议56℃孵育30分钟以降低生物安全风险。

操作流程

核酸提取：

采用磁珠法或柱提法提取RNA，需严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。

推荐加入外源性内标（如MS2噬菌体）监控提取效率。

PCR扩增：

反应体系：包含引物、探针、逆转录酶、Taq DNA聚合酶及dNTPs。

扩增程序：逆转录（50℃ 15分钟）→预变性（95℃ 3分钟）→循环扩增（95℃ 15秒，60℃ 1分钟，共40个循环）。

结果判读：

阳性：Ct值<40且扩增曲线呈典型S型。

阴性：无扩增信号或Ct值≥40。

灰区结果（Ct 35-40）：建议复测或通过测序确认。

质量控制

每批次需包含弱阳性对照（Ct 32±2）、阴性对照及空白对照。

批内变异系数（CV）应<5%，室间质评符合率≥95%。

内标Ct值>32提示样本采集或提取不合格，需重新检测。

注意事项

操作需在BSL-2级实验室进行，废弃物需121℃高压灭菌处理。

避免交叉污染，推荐使用带滤芯吸头及分区操作。

试剂保存于-20℃，避免反复冻融。

局限性

检测结果需结合临床表现及流行病学资料综合判断。

极低病毒载量样本可能产生假阴性，建议对高怀疑样本进行复核或病毒分离。

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