新型布尼亚病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

新型布尼亚病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，针对新型布尼亚病毒（如发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒SFTSV、布尼亚维拉病毒等）的保守基因序列设计特异性引物及探针，实现对病毒RNA的高灵敏度、高特异性检测。适用于科研实验中对可疑样本的病原学分析，不用于临床诊断。

检验原理

通过一步法荧光RT-PCR技术，将病毒RNA逆转录为cDNA后进行扩增，荧光信号与扩增产物同步累积，通过定量分析仪检测循环阈值（Ct值），判定样本中病毒载量。

试剂组成

反应液：含缓冲液、dNTPs、荧光染料等（500μL×2管）

酶混合液：逆转录酶、Taq DNA聚合酶（50μL×1管）

阳性质控品：已知浓度病毒RNA片段（50μL×1管）

阴性质控品：无RNA酶水（250μL×1管）

注：不同批号试剂禁止混用，组分可满足50次检测（20μL/反应体系）。

储存及有效期

储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。

有效期：12个月（以包装标注为准）。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI 7500/QuantStudio系列

安捷伦MX3000P/3005P

Roche LightCycler

Bio-Rad CFX系列

Eppendorf Mastercycler系列

样本要求

样本类型：动物组织（心、肝、脾等）、全血、血清或病毒培养物。

采集与保存：

组织样本：2g，-70℃长期保存（≤6个月）；

液体样本：2mL，短期-20℃保存，运输需2~8℃冰袋。

预处理：需按标准方法提取RNA，建议使用商业RNA提取试剂盒。

操作步骤

试剂准备：

反应液与酶液按比例混合，分装至PCR管。

阳性对照需梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），避免污染。

加样：每反应体系加入5μL模板RNA（或对照品）。

PCR程序设置：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

扩增：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，荧光采集）

结果判读

阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈S型；

阴性：无Ct值或Ct值＞38；

可疑：35＜Ct值≤38，建议重复检测。

注意事项

实验需在PCR洁净区进行，严格分区操作（试剂准备、样本处理、扩增区）。

避免试剂反复冻融，解冻后需彻底混匀并离心。

废弃物质需按生物危害品处理。

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