禽轮状病毒A组染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

禽轮状病毒A组染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用一管式荧光定量RT-PCR技术，通过特异性引物和染料法检测体系，实现对禽轮状病毒A组RNA的定性或定量检测。适用于科研用途（如病毒溯源、流行病学研究），不可用于临床诊断。

试剂盒组成

RT-PCR反应液：包含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲体系。

荧光染料：如SYBR Green等，需避光保存。

阳性对照：非活体DNA片段（10E2-10E7拷贝/μL梯度稀释标准品），需独立操作以避免污染。

模板稀释液：用于标准品稀释及样本预处理。

ROX校正染料（可选）：根据机型需求添加。

操作步骤

1. 样本处理

提取待测样本RNA，建议使用商品化RNA提取试剂盒。

2. 阳性对照稀释（示例：6个梯度）

标记离心管（7至2号），每管加入45μL模板稀释液。

按10倍梯度稀释阳性对照，避免交叉污染。

3. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| RT-PCR反应液 | 10 |

| 荧光染料 | 0.5 |

| 引物混合液 | 2 |

| RNA模板 | 2 |

| RNase-free水 | 补至20 |

4. 上机程序

逆转录：50℃ 15分钟（可选，根据病毒RNA特性调整）。

预变性：95℃ 2分钟。

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40循环。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，分区处理样本、试剂及耗材。

标准品稀释需使用带滤芯枪头，防止气溶胶污染。

反应体系需避光配制，避免荧光淬灭。

不同机型可能需调整ROX添加量，具体参考仪器说明书。

结果判读

阈值设定：以基线信号3-15循环的荧光标准差10倍为阈值。

阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈S型。

阴性对照：应无扩增信号（Ct值≥40或无信号）。

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