大豆拟茎点种腐病菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

大豆拟茎点种腐病菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

技术原理

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，通过SYBR Green等荧光染料与双链DNA结合的特性，实时监测PCR扩增过程中荧光信号的累积。通过分析扩增曲线和Ct值（阈值循环数），实现对目标病原菌DNA的定性和定量检测。

产品特点

即开即用：预混优化反应体系，用户仅需提供模板DNA即可进行实验。

高灵敏度：引物经特异性优化，可检测低至10拷贝/μL的病原菌DNA。

快速高效：全程耗时约1.5小时，显著快于传统培养或形态学鉴定方法。

稳定性强：批内与批间重复性误差≤5%，适用于高通量检测需求。

操作流程

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从大豆种子/植株组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

注意事项

避免反复冻融试剂，分装后使用。

实验需在无菌环境下操作，防止交叉污染。

阳性对照建议与待测样本同步检测，以排除假阴性。

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