立枯丝核菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

立枯丝核菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）的快速、高灵敏度检测。适用于科研领域的定性及定量分析，具有操作简便、特异性强、线性范围广等特点。

实验流程

DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。

标准曲线制备（样本制备区）

标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。

梯度稀释阳性对照：

7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；

依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。

所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

试剂配制（试剂准备区）

反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。

每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。

加样（样本处理区）

分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。

盖紧管盖，避免气泡干扰。

PCR扩增（核酸扩增区）

按以下程序运行定量PCR仪：

预变性：95℃ 2分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析（可选）。

数据分析

定量检测：以标准品浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本拷贝数。

定性检测：Ct值≤35且熔解峰单一判为阳性。

注意事项

严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。

使用一次性耗材及专用工作服，实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。

反应液需避光保存，避免反复冻融。

若用于定量，建议每个样本设3次技术重复。

产品规格

规格：50次/盒（20 μL体系）。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

声明

本试剂盒仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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