青枯雷尔氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

青枯雷尔氏菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品特点

高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应或几百拷贝/反应（钦诚生物）。

高特异性：引物针对青枯雷尔氏菌保守序列设计，无交叉反应。

即开即用：预混优化引物和反应体系，用户仅需提供DNA模板。

双重用途：支持定性和定量检测，定量线性范围≥5个数量级。

质控保障：含阳性对照（非活体DNA片段），避免假阴性。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI系列（如7500、StepOnePlus）

安捷伦（MX3000P/3005P）

Roche LightCycler

Bio-Rad（CFX系列）

Eppendorf Mastercycler

自备试剂

样本DNA（推荐纯度A260/A280=1.8-2.0）。

10×ROX校正染料（部分机型需添加，参照仪器说明书）。

操作步骤

1. DNA提取

使用兼容的核酸提取试剂盒制备样本DNA。

2. 标准曲线制备（定量检测需选做）

按10倍梯度稀释阳性对照（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管（7~2号），依次加入稀释液和模板，涡旋混匀。

3. PCR反应体系配制

每20μL反应体系建议：

2×qPCR预混液 10μL

引物混合物 0.4μL

DNA模板 2μL

补足无核酸酶水至20μL。

4. 上机程序

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

结果分析

定性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

定量：根据标准曲线计算拷贝数。

注意事项

分区操作：样本制备、PCR配制、扩增需分区域进行。

避免污染：使用带滤芯枪头，阳性对照与样本分装隔离。

仅限科研：不可用于临床诊断。

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