苹果锈果类病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

苹果锈果类病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品特点

即开即用：用户仅需提供样品RNA模板，操作简便。

高灵敏度：引物及探针经优化设计，可检测低拷贝数目标序列。

高特异性：针对苹果锈果类病毒高度保守区设计引物，避免与其他病毒RNA交叉反应。

内置对照：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL），便于区分假阴性结果。

兼容性：适用于染料法荧光定量RT-PCR，线性范围覆盖5个数量级。

试剂盒组成

5×双酶一管式RT-PCR Buffer：200μL/管

MMLV-Taq Mix：75μL/管

超纯水：1mL/管

苹果锈果类病毒引物混合液：100μL/管

阳性对照（非活体DNA片段）：50μL（1×10^8拷贝/μL）

核酸释放剂：1mL（20次用量）

使用手册：1份

实验操作流程

样品制备

建议设置N+2个提取反应（N为待测样品数，另加阳性对照PC和阴性对照NC）。

阴性对照：超纯水；阳性对照：试剂盒提供DNA片段稀释至与样品体积一致。

使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样品。

RT-PCR反应

反应体系：20μL（含模板RNA、引物、缓冲液、酶混合液等）。

反应程序：按说明书建议设置逆转录（50℃ 30min）、预变性（95℃ 10min）、扩增循环（95℃ 15s → 60℃ 60s，40循环）。

结果分析

定性检测：取5-10μL产物进行1.5%-2.0%琼脂糖凝胶电泳，观察特异性条带。

定量检测：通过荧光定量PCR仪分析Ct值，标准曲线法计算病毒拷贝数。

注意事项

避免反复冻融试剂，分装后使用。

实验废弃物需按生物安全规范处理，防止污染。

阳性对照为DNA片段，不可用于活病毒实验。

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