硫嘌呤甲基转移酶染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品特点

即开即用：预混优化试剂，仅需提供样品RNA模板。

高灵敏度与特异性：

引物及染料针对TPMT基因高度保守区设计，避免交叉反应。

检测限低至单拷贝级别，适用于低丰度样本。

质量控制：

含阳性对照，有效区分假阴性结果。

推荐设置技术重复（3孔）及阴性对照（NTC），符合MIQE准则。

高效稳定：

适配主流qPCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。

预混液含稳定荧光染料，支持低/高Rox校正。

实验流程

试剂准备

解冻与混匀：

试剂置于冰上缓慢解冻（5-10分钟），避免反复冻融。

轻柔颠倒混匀后短暂离心（1000 rpm，10秒）。

模板处理：

建议使用1×Dilution Buffer稀释cDNA至Ct值20-30范围。

反应体系配置（20μL/孔）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混液（含染料） | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| cDNA模板 | 2 |

| RNase-free H₂O | 6 |

注：

每样本设3次技术重复，需同步设置阴性对照（NTC）及内参基因（如GAPDH）。

qPCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 关闭 |

| 扩增 | 95℃ | 10 sec | 40 | 开启 |

| | 60℃ | 30 sec | | |

注意事项

样本要求：

RNA样本需无降解（RIN≥7），保存于液氮、干冰或Trizol中。

污染控制：

实验分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区）。

使用RNase-free耗材，避免气溶胶污染。

数据分析：

采用ΔΔCt法计算基因相对表达量，需内参基因校正。

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