解淀粉芽孢杆菌染料法qPCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）的快速、高灵敏度检测。适用于科研领域的定性及定量分析，具有即开即用、特异性强、线性范围广等特点。

产品参数

包装规格：50次/盒（20μL反应体系）

用途：科研检测

检测方法：SYBR Green染料法

灵敏度：可检测低至1×10^1拷贝/μL的靶标DNA

线性范围：至少覆盖5个数量级（1×10^1~1×10^6拷贝/μL）

适用仪器：兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、LightCycler 480、Bio-Rad CFX等），无需ROX校正（特定仪器除外）。

试剂盒组成

2×qPCR预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料。

引物混合液：针对解淀粉芽孢杆菌保守序列设计的特异性引物。

阳性对照：1×10^8拷贝/μL的标准品DNA。

模板稀释液：用于标准曲线制备。

超纯水：无核酸酶污染。

操作步骤

标准曲线制备

标记6管为7至2号，每管加入45 μL模板稀释液。

7号管加入5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品。

依次梯度稀释至2号管（1×10^2拷贝/μL），冰上保存备用。

样品DNA制备

使用常规核酸提取方法纯化待测样本DNA。

建议设置N+2个样本（含阳性/阴性对照）。

qPCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×qPCR预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA（或标准品） | 6 |

| 超纯水 | 2 |

PCR程序

预变性：95℃, 3分钟。

循环阶段（40 cycles）：

95℃, 15秒（变性）

60℃, 30秒（退火/延伸，采集荧光信号）

熔解曲线分析：60~95℃，升温速率0.5℃/秒。

数据分析

定量分析：根据标准曲线计算样本拷贝数。

定性判定：Ct值≤35且熔解曲线为单一峰视为阳性。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免交叉污染。

阳性对照需与样本分区域操作。

不同仪器需优化退火温度及循环次数。

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