荧光素酶染料法荧光定量PCR试剂盒

荧光素酶染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于SYBR Green I染料法或荧光素酶检测原理，专用于一步法实时荧光定量PCR（qPCR）或定性PCR分析，适用于RNA/DNA模板的高灵敏度检测。试剂盒整合反转录与扩增步骤，优化反应体系以提升检测效率和稳定性。

产品组分

核心反应预混液：含热启动Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green I或荧光素酶底物）。

酶混合物：包括耐热反转录酶（适用于RNA模板）。

阴性/阳性对照：提供标准品用于校准（部分产品含梯度稀释阳性对照）。

无核酸酶水：用于体系配制。

保存条件与保质期

储存温度：-20℃避光保存，避免反复冻融（4℃可稳定存放3个月）。

有效期：24个月（生产日期见包装标签）。

技术参数

灵敏度：

RNA模板：最低检测限0.1 pg（高表达靶标）至1 pg（中等表达靶标）。

DNA模板：可检测单拷贝基因。

特异性：熔解曲线分析确保扩增产物单一性。

兼容性：适配主流荧光定量PCR仪（支持No Rox/Low Rox/High Rox平台）。

操作流程

1. 样本准备：

RNA/DNA提取：按标准方法纯化样本，避免降解。

阳性对照稀释：按10倍梯度稀释至10E2–10E7拷贝/μL（需独立操作防止污染）。

2. 反应体系配制（以20 μL为例）：

| 组分 | 体积 |

| 2×预混缓冲液 | 10 μL |

| 酶混合物 | 1 μL |

| 模板RNA/DNA | 2 μL |

| 引物（10 μM） | 各0.4 μL |

| 无核酸酶水 | 至20 μL |

3. 程序设置：

反转录（RNA模板）：50℃ 15分钟。

预变性：95℃ 5分钟。

扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环），采集荧光信号。

熔解曲线分析（染料法）：60–95℃逐步升温。

注意事项

应用限制：仅限科研使用，不适用于临床诊断或治疗。

污染控制：分区操作（样本处理、扩增、检测），使用带滤芯枪头。

数据解读：定性检测需结合电泳验证；定量分析需标准曲线。

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