近平滑念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

近平滑念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用SYBR Green I染料法荧光定量PCR技术，专用于检测近平滑念珠菌（Candida parapsilosis）的核酸。通过优化引物体系和反应条件，可实现高灵敏度、高特异性的定量检测，适用于临床样本、环境样本及科研中的核酸分析。

试剂盒组分

2×荧光PCR预混液：含SYBR Green I染料、dNTPs、耐热DNA聚合酶及优化缓冲体系。

阳性对照：预稀释的近平滑念珠菌DNA片段（10^8拷贝/μL），需按说明书进一步稀释。

阴性对照：无核酸酶水。

模板稀释液：用于标准品梯度制备。

注：具体组分以实际包装清单为准。

操作步骤

标准品稀释（以10^2-10^7拷贝/μL梯度为例）：

标记6管，分别加入45 μL模板稀释液。

取5 μL阳性对照（10^8拷贝/μL）加入第1管，震荡混匀得10^7拷贝/μL标准品，依次稀释至10^2拷贝/μL。

稀释需在独立区域操作，避免交叉污染。

PCR反应体系配制（20 μL体系）：

2×预混液：10 μL

引物混合液：2 μL

模板DNA：2 μL

无核酸酶水：补至20 μL

扩增程序：

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增。

性能参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶标DNA。

特异性：不与其他念珠菌属或常见微生物DNA交叉反应。

重复性：CV值≤5%（高、中、低浓度模板）。

线性范围：10^2-10^7拷贝/μL（R²≥0.99）。

注意事项

实验需在分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区）内完成，避免气溶胶污染。

阳性对照含非感染性DNA片段，但仍需按生物安全规范处理。

熔解曲线需呈现单一峰值，否则提示非特异性扩增。

储存与有效期

未开封试剂盒：-20℃避光保存，有效期12个月。

开封后预混液：4℃保存不超过1个月，避免反复冻融。

应用范围

适用于科研用途，不用于临床诊断。

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