鼠呼肠孤病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

鼠呼肠孤病毒3型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒用于鼠呼肠孤病毒3型（Mouse Reovirus Type 3, RV3）的定性及定量检测，采用探针法荧光定量RT-PCR技术，具有高灵敏度和特异性。适用于科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

RT-PCR反应液：包含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs及优化引物探针。

阳性对照：无传染性的DNA片段（1×10^7拷贝/μL）。

阴性对照：无核酸酶水。

荧光PCR专用模板稀释液。

其他辅助试剂（如适用）。

实验前准备

样本要求：需提供提取的病毒RNA模板，建议使用柱式病毒RNA提取试剂盒或兼容的核酸纯化方法。

设备校准：确保荧光定量PCR仪已校准，反应孔清洁无污染。

分区操作：核酸提取、试剂配制及扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

标准曲线制备（定量检测）

稀释阳性对照：按6个10倍梯度稀释（10^1–10^6拷贝/μL），每步更换枪头并充分震荡。

标记离心管：依次编号6至1，加入45 μL稀释液后，逐级加入5 μL上一步稀释液。

保存条件：稀释后标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

RT-PCR反应体系

反应体积：20 μL/孔，含模板RNA 2–5 μL。

程序设置：

逆转录：50°C 15分钟

预变性：95°C 3分钟

扩增循环：95°C 15秒 → 60°C 30秒（40循环，荧光采集）

质量控制

阴阳性对照：每批次实验需同步检测，阳性对照Ct值≤35且阴性对照无扩增。

重复性验证：建议临界值样品重复3次，CV≤5%。

结果判读

定量分析：通过标准曲线计算拷贝数。

定性分析：Ct值≤38判定为阳性，＞38或无扩增为阴性。

注意事项

避免试剂反复冻融，开封后尽快使用。

操作时佩戴防护用具，废弃物料需按生物安全规范处理。

若检测环境湿度高，建议使用带芯枪头以减少气溶胶污染。

有效期与储存

有效期：-20°C避光保存12个月，避免反复冻融。

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