猪蓝耳病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

猪蓝耳病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，用于定性检测高致病性及经典株猪蓝耳病毒（PRRSV）的核酸。通过特异性引物和探针设计，靶向病毒基因组保守区域，结合荧光信号实时监测，实现对病原体的快速、精准检测，适用于临床诊断、流行病学调查及疗效评估。

检验原理

采用TaqMan探针法，通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增目标核酸序列。反应体系中，荧光探针与靶基因结合后释放信号，由荧光定量PCR仪动态监测扩增曲线，通过阈值循环数（Ct值）判定结果。

试剂盒组成

规格：25T/盒或50T/盒

| 组分 | 25T/盒规格 | 50T/盒规格 |

| RT-PCR反应液 | 437.5 μL/管（或500 μL） | 875 μL/管（或500 μL×2） |

| 混合酶液 | 62.5 μL/管（或25 μL） | 125 μL/管（或50 μL） |

| 阳性对照 | 40 μL/管（或250 μL） | 40 μL/管（或250 μL） |

| 阴性对照（灭菌纯水）| 40 μL/管（或250 μL） | 40 μL/管（或250 μL） |

| 说明书 | 1份 | 1份 |

注：

阳性对照为含PRRSV靶基因的质粒。

不同批号组分不可混用。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括但不限于：

ABI 7500、Bio-Rad系列

安捷伦MX3000P/3005P、Roche LightCycler

杭州博日系列、Cepheid SmartCycler

储存条件与有效期

储存：避光保存于-20℃以下，避免反复冻融。

有效期：12个月。

操作步骤

样本处理

使用磁珠法或离心柱法提取核酸，按提取试剂说明书操作。

试剂配制

反应体系配置（以单反应为例）：

RT-PCR反应液：17.5 μL

混合酶液：2.5 μL

模板RNA：5 μL

总反应体积：25 μL/管。

PCR扩增程序

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 45秒（采集荧光信号）

结果判读

阳性：Ct值≤35且有明显扩增曲线。

阴性：无扩增曲线或Ct值＞38。

注意事项

实验分区操作（样本处理区、试剂准备区、扩增区），避免污染。

试剂解冻后需充分混匀，离心后使用。

若检测样本为强阳性，建议稀释后复测。

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