小麦内标准GAG56D基因染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品特点

即开即用：用户仅需提供样品DNA模板，无需额外配制反应体系。

高特异性：引物针对小麦GAG56D基因高度保守区设计，避免与其他微生物DNA交叉反应。

内置对照：提供阳性对照，有效区分假阴性结果。

便捷电泳：PCR Mix含上样染料，反应后可直接电泳分析。

优化性能：预混液经严格优化，确保扩增效率与稳定性。

操作流程

1. 样品准备

DNA提取：按标准方法提取样品DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. PCR反应体系配制（以20μL为例）

| 成分 | 体积（μL） |

| 2× PCR Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| ddH₂O | 6 |

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度（℃） | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95 | 5 min | 1 |

| 变性 | 95 | 30 sec | 35 |

| 退火 | 55-60* | 30 sec | |

| 延伸 | 72 | 30 sec | |

| 终延伸 | 72 | 5 min | 1 |

*注：退火温度需根据引物Tm值优化。

4. 结果分析

通过荧光定量PCR仪检测扩增曲线，或通过琼脂糖凝胶电泳（1.5%-2%）观察目的条带。

实验参数设置

基线设定：建议选择循环数6~15，起始点避开信号波动阶段，终止点早于最早扩增样本Ct值1~3个循环。

扩增程序：

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

注意事项

实验分区：试剂配制、样品处理及扩增需在不同区域进行，避免污染。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

适用范围：仅限科研，不适用于临床诊断或生产用途。

质量控制：建议每次实验同步运行阳性对照与无模板对照（NTC）。

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