人X染色体染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品基本信息

规格：50T/盒

检测方法：染料法荧光定量PCR（SYBR Green等非特异性染料）

适用样本：人源性DNA模板

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

试剂盒组分

预混液：含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（Cat#N132034，支持No/Low/High Rox校正）。

阳性对照：人X染色体特异性DNA片段（10^8拷贝/μL，需按10倍梯度稀释使用）。

模板稀释液：用于标准曲线制备或样本稀释。

RNase-free超纯水：用于体系配置或模板稀释。

实验前准备

设备与耗材：

qPCR仪（兼容染料法检测通道）、移液器、冰盒、RNase-free八连排管/96孔板、离心机。

试剂处理：

预混液需从-20℃取出后置于冰上缓慢解冻（5-10分钟），轻颠倒混匀，避免涡旋或产生气泡。

阳性对照稀释需在独立区域进行，使用带滤芯枪头防止污染（梯度稀释方法见下文）。

标准曲线制备（以10^2-10^7拷贝/μL为例）

标记6管，分别加入45 μL稀释液。

取5 μL阳性原液（10^8拷贝/μL）加入第一管，震荡混匀得10^7拷贝/μL，依次稀释至10^2拷贝/μL。

反应体系配置（20 μL体系示例）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混液 | 10 |

| 引物（10 μM） | 0.8（终浓度400 nM） |

| 模板DNA | 2 |

| RNase-free水 | 补至20 |

PCR程序设置

预变性：95℃ 3分钟。

循环阶段（40 cycles）：

95℃ 10秒（变性）

60℃ 30秒（退火/延伸，采集荧光信号）。

熔解曲线分析（可选）：60-95℃，每0.5℃递增，验证产物特异性。

质量控制

阴性对照（NTC）：以水替代模板，监测污染。

内参基因：推荐GAPDH或β-actin，用于数据归一化。

技术重复：建议3复孔，确保数据可靠性。

注意事项

操作全程需RNase-free环境，避免反复冻融试剂。

熔解曲线出现多峰提示非特异性扩增，需优化引物或退火温度。

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