C-a-spase-4活性测定试剂盒比色法/100T 新品

C-a-spase-4活性测定试剂盒比色法/100T

中文名称  ：Caspase-4 活性检测试剂盒

英文名称  ：Caspase-4Activity Assay Kit

储存条件  ：6 个月

产品包装  ：盒装

检测方法  ：比色法

有 效 期 ： -20℃

产品规格  ：20T  、 50T  、 100T

试剂盒的组成和配制：

产品简介：
Caspase 是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含 10 多个成员。 Caspase-4 可以和 Apaf- 1 相互作用 ，并参与细胞色素 c 导致的  Caspase-3 激活 ，也可以和 caspase- 14 相互作用。

试剂盒测定原理基于 Caspase-4 特异水解其多肽底物 Ac-LEVD-pNA ，释放出游离的硝基苯胺  pNA ，后者呈黄 色在 405 nm 具有大吸收峰 ，采用可见光光度比色法测定。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、 100μL 玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、研 钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

样本处理（可适当调整待测样本量）：

1、培养细胞：先收集细胞到离心管内 ，离心后弃上清； 按照细胞数量（约 10⁶个）加 100 μL 试剂二（若裂解不充分可提高至  150-200μL），震荡重悬沉淀，置冰上静置 15 min，4℃  , 15000g 离心 10- 15min ，取上清置冰上待 测。

2、组织： 按照组织质量（g）：试剂二体积（ mL）为  1： 5~10  的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入  1 mL  试 剂二），冰浴研磨或充分剪碎，置冰上静置 15 min  ，4℃ , 15000g离心  10- 15min ，取上清置冰上待测。

测定步骤：

1  可见分光光度计/酶标仪预热 30 min  以上 ，调节波长至 405 nm ，蒸馏水调零。

2  临用前用标准品稀释液将 5 mmol/L pNA 标准品稀释至  200  、 100  、 50  、 25  、 12.5  、0 μmol/L 的标准溶液待用。

注 意：
实验之前建议选择  2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。