C-a-spase-1 活性测定试剂盒比色法/100T 新品

C-a-spase-1 活性测定试剂盒比色法/100T

中文名称  ：Caspase-1活性检测试剂盒

英文名称  ：Caspase-1 Activity Assay Kit

产品别名  ：Caspase1 活性测定试剂盒

储存条件  ：6 个月

产品包装  ：盒装

检测方法  ：比色法

有 效 期 ： -20℃

产品规格  ：20T  、 50T  、 100T

试剂盒的组成和配制：

产品简介：
Caspase是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族 ，包含  10 多个成员。 Caspase- 1 是唯一可剪切  IL- 1b 和  IL- 18  前体产生活性细胞因子的  caspase  。Caspase- 1 通过剪切  Bcl-XL调节细胞凋亡 ，并通过对细胞因子前体的剪切来调控相 关细胞因子介导的免疫炎性反应。基于  Caspase- 1 特异水解多肽底物 Tyr-Val-Ala-Asp-p-nitroanilide (YVAD-pNA) ，释放的游离硝基苯胺 pNA 在 405 nm 有大吸收峰。采用可见光光度比色法测定  pNA 而得到Caspase 活性。适用于检测哺乳动物组织、细胞 Caspase- 1 活性。

需自备的仪器和用品：

实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验 ，如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

样本处理（可适当调整待测样本量）

1、培养细胞： 先收集细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（约 10⁶个） 加 100 μL 试剂二（若裂 解不充分可提高至  150-200  μL），震荡重悬沉淀 ， 置冰上静置  15 min， 4℃ , 15000g 离心 10- 15min ，取上清置冰上  待测。

2、组织： 按照组织质量（g）：试剂二体积（ mL）为  1： 5~10  的比例（建议称取约 0.1 g 组织，加入  1 mL  试 剂二），冰浴研磨或充分剪碎，置冰上静置 15 min  ，4℃ , 15000g离心  10- 15min ，取上清置冰上待测。

 注意事项：

1、由于试剂二一中含有还原剂（ DTT），建议将样品用水稀释 2 倍后 ，用Bradford法测定蛋白浓度 ，以降低 DTT 对蛋白浓度测定的干扰。不建议使用  BCA  法测定蛋白浓度。

2、Caspase 活性测定值低常见的原因是细胞未发生凋亡或细胞量太少 ，其次是观测时间不恰当。诱导凋亡时 ，并非剂量越大时间越长 Caspase 活性就越高。  建议设置不同剂量和时间点如 0、 2  、4  、8  、 16、24 小时 ，以检测佳的观察点。

3、所测样本的值高于标准曲线上限时 ，可用试剂二稀释样本后重新测定。

4、盖紧 96 孔板盖子并用封口膜密封。 37ºC 孵育 ， 肉眼可见颜色变黄时的 OD405 值约为 0.2，此时即可测定。颜色变化不明显可延长反应或过夜，但酶活性较强时，孵育时间过长将导致反应失去线性关系。