Fluorescein-12-UTP 10mM Sodium Solution

1. 化学结构与核心特性

• 间隔臂设计：12 原子氨基己酰基间隔臂避免荧光素与 RNA 聚合酶或靶标分子的空间冲突，掺入效率可达天然 UTP 的 80%-90%，同时保证 RNA 分子的杂交特异性不受影响；

• 光谱特性：激发波长 494-498nm，发射波长 517-520nm，呈现明亮的绿色荧光，与 FITC 滤光片组完全兼容，适用于共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光扫描仪等多种设备；

• 荧光性能：荧光素的消光系数高达 70,000 cm⁻¹M⁻¹，量子产率约 0.92，具有高亮度和良好的光稳定性，可满足长时间成像需求，信号信噪比高；

• 纯度与稳定性：产品纯度≥95%（HPLC 检测），无核酸酶、蛋白酶及重金属污染，pH 值 7.5（Tris-HCl 缓冲），外观为无菌透明水溶液，避光保存于 - 20℃至少 2 年有效，避免反复冻融。

2. 标记机制与实验优势

• 直接可视化：标记后的 RNA 无需额外的抗体或链霉亲和素结合步骤即可通过荧光显微镜或扫描仪直接检测，简化实验流程并减少背景干扰；

• 低毒性与安全性：完全替代放射性标记探针，避免放射性污染风险，实验废弃物处理简便，符合生物安全规范；

• 多色荧光兼容：可与 Cy3-UTP、Cy5-UTP 等其他荧光标记核苷酸联用，实现多目标同时检测，适用于复杂生物系统的多组学分析；

• 高特异性：荧光素与核酸的非特异性结合极低，标记后的 RNA 探针杂交特异性与天然 RNA 相当，可用于高分辨率的基因定位研究。

3. 实验操作与储存建议

• 体外转录条件优化：模板需含 T7/T3/SP6 启动子，推荐使用线性化质粒或 PCR 产物（避免环状模板导致的转录提前终止）；反应体系中加入 RNase 抑制剂（如 RNasin）和适量 DTT（10mM），37℃孵育 1-4 小时，通过琼脂糖凝胶电泳验证 RNA 完整性。

• 掺入比例控制：Fluorescein-12-UTP 与天然 UTP 的比例建议为 1:1 至 1:4，过高比例可能降低转录效率，过低则标记密度不足；例如，20μL 反应体系中加入 2μL 10mM Fluorescein-12-UTP 和 6μL 10mM UTP，标记效率最佳，可在荧光强度与 RNA 产量间达到平衡。

• 标记后处理：转录产物经 DNase I 消化模板 DNA，通过酚 - 氯仿抽提或 RNA 纯化柱去除游离核苷酸，避免残留 Fluorescein-12-UTP 干扰后续杂交反应；纯化后的 RNA 探针可通过荧光分光光度计定量，确保实验重复性。

• 储存与安全：产品需避光保存于 - 20℃，建议分装为 10-20μL / 管，避免反复冻融导致荧光素降解；操作时佩戴手套和口罩，避免皮肤接触和吸入，荧光素可能对眼睛有刺激性，实验时需注意防护。

4. 典型应用案例

• 癌症研究：标记 lncRNA MALAT1 探针用于 FISH 实验，定位其在肺癌细胞中的核斑分布，揭示其与肿瘤转移的相关性，为预后评估提供分子标志物；

• 神经科学：标记神经元特异性 mRNA 探针（如 Map2、Tau），通过原位杂交观察小鼠大脑发育过程中基因表达的时空变化，阐明神经分化的分子机制；

• 病毒诊断：制备 SARS-CoV-2 的 S 基因荧光素标记 RNA 探针，结合 RT-PCR 和荧光检测系统，实现临床样本中病毒 RNA 的快速检测，检测限低至 10 拷贝 /μL，适用于大规模筛查。