Biotin-16-UTP 10mM Sodium Solution

1. 化学结构与核心特性

• 间隔臂设计：16 原子间隔臂（由氨基己酸和氨基丁酸组成）避免生物素与 RNA 聚合酶或靶标分子的空间冲突，掺入效率可达天然 UTP 的 80%-90%；

• 酶促兼容性：可被 T7、T3、SP6 等噬菌体 RNA 聚合酶及真核 RNA 聚合酶高效识别，掺入比例建议为反应体系中 UTP 总量的 20%-50%，平衡标记效率与 RNA 产量；

• 稳定性：生物素与 UTP 的共价键在常规实验条件（pH 7.0-8.5，37℃）下稳定，标记的 RNA 探针在 - 80℃可保存 6 个月以上，反复冻融不影响生物素活性。

  产品关键指标：纯度≥95%（HPLC 检测），无核酸酶污染，pH 值 7.5（Tris-HCl 缓冲），外观为无菌透明水溶液，避免强光照射。

2. 标记机制与实验优势

• 信号放大效应：单个生物素可结合 4 个链霉亲和素分子，通过多级放大（如链霉亲和素 - 辣根过氧化物酶 - 底物系统）实现皮克级 RNA 检测，灵敏度显著高于直接荧光标记；

• 低背景干扰：生物素与核酸无特异性结合，链霉亲和素对 DNA/RNA 的非特异性吸附低，实验信噪比高，适合复杂样本（如组织匀浆、细胞裂解液）分析；

• 多技术兼容性：可与荧光、化学发光、比色等检测系统联用，适配共聚焦显微镜、流式细胞仪、酶标仪等多种设备，支持多重标记实验（如与 Cy3/Cy5 荧光探针联合使用）。

3. 实验操作与储存建议

• 体外转录优化：模板需含 T7/T3/SP6 启动子，推荐使用线性化质粒或 PCR 产物（避免环状模板导致的转录提前终止）；反应体系中加入 RNase 抑制剂（如 RNasin）和适量 DTT（10mM），37℃孵育 1-4 小时，通过琼脂糖凝胶电泳验证 RNA 完整性。

• 掺入比例控制：Biotin-16-UTP 与天然 UTP 的比例建议为 1:1 至 1:4，过高比例可能降低转录效率，过低则标记密度不足；例如，20μL 反应体系中加入 2μL 10mM Biotin-16-UTP 和 6μL 10mM UTP，标记效率最佳。

• 标记后处理：转录产物经 DNase I 消化模板 DNA，通过酚 - 氯仿抽提或 RNA 纯化柱去除游离核苷酸，避免残留 Biotin-16-UTP 干扰后续亲和反应。

• 储存与安全：产品需避光保存于 - 20℃，避免反复冻融（建议分装为 10-20μL / 管）；操作时佩戴手套和口罩，避免皮肤接触和吸入，实验废弃物按生物安全规范处理。

4. 典型应用案例

• 癌症研究：标记 lncRNA HOTAIR 探针用于 FISH 实验，定位其在乳腺癌细胞中的亚细胞分布，揭示其与肿瘤侵袭转移的相关性，为预后评估提供分子标志物；

• 神经科学：标记神经元特异性 mRNA 探针，通过原位杂交观察小鼠大脑发育过程中基因表达的时空变化，阐明神经分化的分子机制；

• 病毒诊断：制备 SARS-CoV-2 的 N 基因生物素化 RNA 探针，结合 RT-PCR 和链霉亲和素磁珠富集，实现临床样本中病毒 RNA 的超灵敏检测，检测限低至 10 拷贝 /μL。