人脐动脉平滑肌细胞永生化；HUASMC-SV40T 新品

人脐动脉平滑肌细胞永生化；HUASMC-SV40T

商品属性

产品概述

HUASMC-SV40T是通过SV40大T抗原转导实现永生化的脐动脉平滑肌细胞系，保留原代细胞的收缩表型和功能特性，适用于生物学研究、药物筛选及病理机制探究。

关键背景

永生化原理：通过转染SV40大T抗原（Simian Virus 40 Large T Antigen）基因，抑制p53和Rb抑癌通路，使细胞突破复制衰老（Hayflick极限）

鉴定特征：

标志物：α-SMA（α-平滑肌肌动蛋白）免疫荧光阳性（纯度>95%），不表达CD31（内皮细胞标志物）

功能验证：可被KCl或去甲肾上腺素诱导收缩，具备钙依赖性收缩反应

核型与安全性：近二倍体核型（46, XY/XX），裸鼠成瘤性阴性（避免致瘤风险）

生长特性

形态：长梭形或纺锤形，呈“束状”或“漩涡状”排列（典型平滑肌细胞形态）

倍增时间：约36小时（比原代HUASMC快1.5倍，传代周期更短）

传代稳定性：连续传代50代后仍保持α-SMA表达和收缩功能

培养条件

培养基：推荐使用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12基础培养基，补充1%青霉素-链霉素及2mM L-谷氨酰胺。

pH与气体环境：维持pH 7.2–7.4（培养液呈微红色），CO₂浓度5%，温度36.5℃。若培养液偏黄（酸性），需用NaHCO₃调整。

传代操作：

细胞密度达80%汇合时，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化，按1:2至1:3比例传代。

传代后离心（1000rpm, 5min）重悬，接种于新培养瓶。

质量控制

验证方法：通过GFAP抗体荧光免疫染色确认细胞纯度及平滑肌特异性标志物（如α-SMA）表达。

无菌检测：每批次细胞经支原体、细菌、真菌检测，确保无污染。

常见问题处理

细胞漂浮：轻微漂浮可静置培养箱过夜，多数细胞会重新贴壁；持续漂浮需离心转移至新瓶。

污染风险：若培养瓶破裂或漏液，立即终止使用并联系技术支持。

储存与运输

运输条件：常温（T25培养瓶充满培养液）或冻存（液氮保存，含90%FBS+10%DMSO）。

复苏建议：37℃水浴快速解冻，离心去除冻存液后接种，24小时后更换新鲜培养基。

应用领域

平滑肌增殖、迁移研究

动脉粥样硬化及高血压模型构建

药物毒性及疗效评估

注意事项

避免反复冻融，建议使用5代以内细胞以保证表型稳定性。

培养时瓶盖需拧松半圈以确保气体交换。
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