人皮肤鳞状细胞癌细胞；Colo-16 (STR) 新品

人皮肤鳞状细胞癌细胞；Colo-16 (STR)

商品属性

核心背景

来源：1980年从一名65岁男性皮肤鳞状细胞癌患者的原发灶分离

分子特征：

p53突变（热点突变R273H，与皮肤鳞癌高频突变一致）

EGFR过表达（免疫组化评分3+，可作为靶向治疗研究靶点）

鳞状分化标志物：表达CK5/6、CK14，不表达CK7（排除腺癌来源）

STR鉴定关键位点（需与ATCC标准匹配）：

位点 等位基因 位点 等位基因

Amelogenin X,Y D16S539 9,13

D5S818 11,12 TH01 6,9

生长特性

形态：上皮细胞样（多角形），贴壁生长，呈“漩涡状”排列

倍增时间：36-48小时（比一般癌细胞稍慢，需注意传代时机）

成瘤性：裸鼠皮下接种2×10⁶细胞，10-14天形成可触及肿瘤（成瘤率100%）

培养条件与操作指南

培养基 推荐配方：RPMI-1640（含2mM L-谷氨酰胺）+ 10% FBS + 1%双抗（青霉素100U/mL+链霉素100μg/mL）

替代方案：MEM培养基（需额外添加1mM丙酮酸钠）

培养环境 37℃、5% CO₂、湿度95%，无需包被培养瓶（贴壁能力强）

传代流程 1. 细胞融合度达70%-80%时操作（避免过度融合导致分化）

2. 弃上清，PBS润洗1次，加入0.25%胰酶-EDTA（1mL/T25瓶）

3. 37℃消化2-3分钟（镜下见细胞间隙增大、部分脱落）

4. 加完全培养基终止（5mL/T25瓶），轻柔吹打（避免产生气泡）

5. 按1:3比例接种，T25瓶终体积6mL

冻存方案 冻存液：90% FBS + 10% DMSO，冻存密度2×10⁶ cells/mL，程序降温后液氮保存（建议每支冻存管分装1管T25瓶的细胞量）

研究应用场景

药物敏感性模型

实验类型 操作要点 典型结果

化疗药物筛选 96孔板接种8×10³细胞/孔，测试顺铂（0.1-20μM）、5-FU（1-50μM）等药物，72小时后CCK-8法检测

IC₅₀参考值：顺铂~2μM，5-FU~8μM 顺铂处理后24小时可见明显凋亡（Hoechst染色核固缩）

EGFR靶向治疗研究 吉非替尼（0.01-1μM）处理后，Western Blot检测p-EGFR、p-AKT水平 1μM吉非替尼处理48小时可抑制p-EGFR达70%

侵袭转移研究

Transwell侵袭实验：

上室铺50μL Matrigel（1:8稀释），37℃固化30分钟

接种5×10⁴细胞/孔（无血清培养基），下室加10% FBS诱导

48小时后结晶紫染色，穿膜细胞数约200-300个/视野（10×物镜）

划痕愈合实验：

划痕后48小时愈合率约60%，可通过抑制MMP-2/9降低迁移能力

病毒感染模型

因EGFR高表达，可作为HPV相关皮肤癌研究的替代模型（虽本身不含HPV，但可通过转染HPV E6/E7基因构建病毒致癌模型）

关键注意事项

1. 细胞状态判断技巧

健康状态：细胞边界清晰，胞质透亮，无黑色颗粒（代谢废物积累）

异常信号：若出现大量圆形悬浮细胞（>10%），可能是消化过度或培养基pH异常（正常pH 7.2-7.4，培养基呈桃红色）

2. 实验干扰因素排除

血清批次影响：FBS需筛选低内毒素（<10EU/mL）批次，否则可能激活NF-κB通路干扰实验

传代代数控制：建议使用P10-P30代细胞（代数过高易出现表型漂移，如EGFR表达下降）

3. 特殊实验建议

研究鳞状分化时，可在培养基中添加1.2mM CaCl₂诱导分化（72小时后CK10表达上调）

进行基因编辑（如CRISPR敲除EGFR）时，推荐使用电转染（Lipofectamine转染效率较低，约30%）

传代步骤

准备：细胞汇合度达80%时传代 。

清洗：吸弃旧培养基，用PBS轻柔清洗细胞1次 。

消化：加入0.25%胰蛋白酶消化液1ml，37℃孵育约1分钟。显微镜下观察细胞变圆后吸弃消化液 。

终止：加入完全培养基终止消化。

分瓶：轻柔吹打混匀，按 1:2比例 接种至新培养瓶，补充完全培养基至5ml 。

复苏：新接种细胞静置6-8小时或过夜以稳定状态 。
公司正在出售的产品