人脑神经母细胞瘤；KP-N-YN 新品

人脑神经母细胞瘤；KP-N-YN

商品属性

来源：1972年从一名男性患儿骨髓转移灶中分离建立，具有神经母细胞瘤典型特征，表现为多巴胺-β-羟基酶活性中等水平，细胞形态多样（长突触或上皮细胞样），易形成悬浮团块。

培养条件：需使用含45% MEM（含丙酮酸钠）、45% F-12、10%胎牛血清及1%青霉素-链霉素的混合培养基，贴壁生长。

特性：上皮细胞样形态，贴壁生长，培养基为DMEM补充0.1 mM非必需氨基酸和10%胎牛血清，培养环境需37℃、5% CO₂。

规格：1×10^6 cells/T25培养瓶或冻存管

细胞复苏与初始化

收到细胞后，用75%酒精喷洒消毒细胞瓶表面。

移除封口膜，置于37℃、5% CO?培养箱中静置3-4小时稳定细胞状态。

更换新鲜完全培养基继续培养。

传代操作

细胞覆盖80%培养瓶面积时，弃旧培养液，用PBS清洗1次。

加入0.25%胰蛋白酶消化液1ml，显微镜下观察至细胞变圆回缩。

加入完全培养基终止消化，吹打形成细胞悬液。

1000rpm离心5分钟，弃上清，用12ml新培养基重悬。

按1:2比例分装至新培养瓶，37℃、5% CO?培养。

冻存方法

消化收集细胞后离心，用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬。

分装至冻存管：

程序降温：-20℃ 1.5h → -80℃ 过夜 → 液氮长期保存。

或使用程序降温盒直接置-80℃。

复苏注意事项

从液氮取出时佩戴防爆面具，37℃水浴快速解冻。

酒精擦拭冻存管，转移细胞至含5ml培养基的离心管，离心后重悬培养。

通用安全与存储要求

生物危害性：所有肿瘤细胞需在二级生物安全柜内操作，佩戴防护装备 。

培养条件：37℃、5% CO?、95%空气湿度 。

冻存液：无血清冻存液或FBS/DMSO混合液 。
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