U87MG人脑星形胶质母细胞瘤

商品属性

来源：由J. Ponten等从恶性神经胶质瘤中分离建立，裸鼠皮下接种可成瘤。

细胞形态：上皮样，贴壁生长（易聚团，建议使用多聚-L-赖氨酸包被培养器皿以改善贴壁性）。

应用领域：科研用途，如肿瘤机制研究、药物筛选及外泌体介导的恶性表型分析等。

培养条件

培养基：MEM（含NEAA）＋10%胎牛血清（FBS）＋1%青霉素-链霉素（P/S）。

培养环境：

温度：37℃

气相：95%空气，5% CO₂

传代建议：

传代比例：1:2至1:4

换液频率：每周2-3次

实验操作指南

1. 细胞复苏

快速解冻：将冻存管从液氮或-80℃冰箱取出，迅速放入 37℃ 水浴锅中，轻轻摇晃，使冻存液在 1-2 分钟内完全融化（注意不要让水没过管口）。

转移：用 75% 酒精擦拭管口，将细胞悬液转移至含有 5-10 mL 预热完全培养基的离心管中（稀释 DMSO）。

离心：1000 rpm (约 150-200g) 离心 3-5 分钟。

重悬：弃去上清液，加入新鲜完全培养基重悬细胞，接种于 T25 培养瓶中。

培养：放入 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养。次日更换培养基，以去除死细胞和残留的 DMSO。

2. 细胞传代 (当细胞融合度达 80%-90% 时)

吸液：吸去旧的培养基。

洗涤：加入适量 PBS 缓冲液轻轻润洗细胞 1 次（去除残留血清，利于胰酶发挥作用）。

消化：加入 0.25% 胰蛋白酶 (Trypsin-EDTA) 约 1-2 mL (以覆盖瓶底为宜)，放入 37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。

观察：显微镜下观察，待细胞变圆、间隙变大或开始脱落时，立即进行下一步。

终止：加入含血清的完全培养基终止消化（血清能抑制胰酶活性）。

吹打：轻轻吹打细胞层，使细胞完全脱落并吹散成单细胞悬液。

离心：1000 rpm 离心 3-5 分钟。

分瓶：弃上清，加入新鲜培养基重悬，按 1:2 或 1:3 的比例接种到新的培养

注意事项：

血清质量直接影响细胞状态，建议选用优质FBS。

培养中若出现污染或异常形态，需终止使用并联系。

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