碱性蛋白酶(AKP)测定试剂盒/微量法/48S

碱性蛋白酶(AKP)测定试剂盒/微量法/48S

测定意义：

AKP 是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类，属于丝氨酸蛋白酶。此外，该酶还能够水解酯键、酰胺键，具有转酯及转肽的功能。该酶是主要工业用酶之一，广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。

测定原理：

在碱性条件下，AKP 水解酪蛋白生成酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝；钨蓝在 680nm有特征吸收峰，测定 680nm 吸光度增加速率，来计算 AKP 活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、0.5 mL EP 管和蒸馏水。

测定操作：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min ，调节波长到 680 nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二、试剂三和试剂四置于 40℃水浴保温30min。

3. 对照管：取 0.5 mL EP 管，加入 20 μL 粗酶液，40 μL 试剂二，混匀后置于 40℃水浴保温 10min；加入 40μL试剂三，混匀后 8000g  ，4℃离心 10min；取 40μL 上清液，加入新的 EP 管，再加入 200μL 试剂四，40μL试剂五，混匀后置于 40℃水浴保温20min ，吸取 200μL 于 680nm 测定光吸收，记为 A 对照管。

4. 测定管：取 0.5 mL EP 管，加入 20μL 粗酶液，40μL 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min；加入 40μL试剂二，混匀后 8000g ，4℃离心 10min；取 40μL 上清液，加入新的 EP 管，再加入 200μL 试剂四，40μL试剂五，混匀后置于 40℃水浴保温20min ，吸取 200μL 于 680nm 测定光吸收，记为 A 测定管。（注意与空白管不同，先加试剂三，后加试剂二）

5. 空白管：取 0.5 mL EP 管，加入 40μL 蒸馏水，200μL 试剂四，40μL 试剂五，混匀后置于 40℃水浴保温20min ，吸取 200μL 于 680nm 测定光吸收，记为 A 空白管。

6. 标准管：取 0.5 mL EP 管，加入 40μL 标准品，200μL 试剂四，40μL 试剂五，混匀后置于 40℃水浴保温20min ，吸取 200μL 于 680nm 测定光吸收，记为 A 标准管。

注 意：

空白管和标准管只需要测定一次。