磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)测定试剂盒/微量法/96样

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

PEPC（EC 4.1.1.31 ）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，是催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶，对三羧酸循环的运转起重要调节作用。

测定原理：

PEPC 催化磷酸烯醇式丙酮酸和 CO2 生成草酰乙酸和 HPO42- ，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和 NADH生成苹果酸和 NAD+ ，在 340nm 测定 NADH 减少速率，计算 PEPC 活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定操作：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

(1）取试剂二瓶一瓶，加入 6mL 试剂一和 4.2mL 蒸馏水充分混匀，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min；现配现用。

(2）试剂三工作液的配制：将试剂三原液：试剂三稀释液=1μL:329μL 稀释，混匀，用多少配多少。

(3）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、20μL 试剂三、170μL 试剂二，混匀，立即记录 340nm处 20s 时的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。