糖原磷酸化酶a(GPa)测定试剂盒/微量法/96样

糖原磷酸化酶a(GPa)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase ，GP ，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代谢的关键酶，使糖原分子从非还原端逐个断开 α-1 ，4-糖苷键移去葡萄糖基，释放 1-磷酸葡萄糖，直至临近糖原分子 α-1 ，6-糖苷键分支点前 4 个葡萄糖基处。GP 分为有活性的糖原磷酸化酶 a（GPa）和无活性的糖原磷酸化酶b（GPb）两种形式。糖原的分解主要在 GPa 的催化下进行。

测定原理：

未添加激活剂时，GPa 催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和 1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化 NADP 还原生成 NADPH ，在 340nm 下测定 NADPH 上升速率，即可反映 GPa 活性。

自备仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零；

2、 工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、 试剂三的配制：临用前在试剂三管中加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

4 、 试剂四的配制：临用前在试剂四管中加入 1mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

5 、 将工作液、试剂三和试剂四置于 37℃预热 5 分钟；

6 、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂三、10μL 试剂四、10μL 蒸馏水和 160μL 工作液，立即混匀，记录 340nm 处 5min 后的 A1 和 10min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。