线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)测定试剂盒/微量法/96样

线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

MDH （EC 1.1.1.37 ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中 MDH 是 TCA 循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物， 连接多条重要的代谢途径。因此，MDH 在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性，MDH 分为NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的 MDH ，细菌中通常只含有 NAD-MDH，在真核细胞中，NAD-MDH 分布于细胞质和线粒体中。

测定原理：

MDHm 催化 NADH 还原草酰乙酸生成苹果酸，导致 340nm 处光吸收下降。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、检测工作液的配制：用时在试剂五中加入 19mL 试剂四和 0.5mL 蒸馏水，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、测定前将检测工作液在37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 5μL 样本和 195μL 工作液，混匀后立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 1min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。