OVCAR-3人卵巢腺癌细胞 新品

OVCAR-3人卵巢腺癌细胞

商品属性

形态特性：上皮细胞样，贴壁生长

建系背景：源自54岁白人女性卵巢腺癌组织，1976年建系。

培养条件

培养基：DMEM-H（高糖，4.5g/L葡萄糖）补充10%胎牛血清（FBS）。

传代方法：1:3比例传代，每2-3天更换培养液。

冻存条件：基础培养基+5%DMSO+20%FBS，液氮长期保存。

运输与保存

运输方式：干冰保存运输，到货后需立即转入液氮保存。

复苏步骤：

37℃水浴快速解冻（2分钟内）；

离心（1000 rpm，5分钟）后弃上清；

重悬于新鲜培养基，接种至培养瓶。

质量控制

纯度：≥98%，支原体检测阴性。

活性验证：建议到货后24小时内通过台盼蓝染色法检测细胞活力。

操作指南

细胞接收与初始处理

取出培养瓶，用75%酒精消毒表面，移除封口膜后置于37℃、5% CO?培养箱静置3-4小时稳定细胞状态。

更换新鲜完全培养基继续培养或传代。

细胞传代

消化：当细胞覆盖80%培养面积时，弃旧培养基，PBS清洗后加入0.25% Y蛋白酶消化液1ml，显微镜下观察至细胞变圆。

终止消化：加入完全培养基终止反应，轻柔吹打使细胞脱落，转移至离心管（1000rpm离心5分钟）。

分瓶：弃上清，用12ml完全培养基重悬，按1:2比例分瓶培养。

细胞冻存

消化收集：同传代步骤1-2，离心后弃上清。

冻存液制备：用冻存液（FBS:DMSO=9:1）重悬细胞，分装至冻存管。

梯度降温：

-20℃保存1.5小时 → -80℃过夜 → 24小时后转入液氮长期保存。

若使用程序降温盒，可直接放置于-80℃。

细胞复苏

解冻：从液氮中取出冻存管（需防爆措施），37℃水浴快速解冻至无结晶。

离心清洗：将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管（1000rpm离心5分钟），弃上清后重悬。

培养：接种至T25培养瓶，37℃、5% CO?培养箱中培养，贴壁后换液。

注意事项

仅限科研用途，不可用于临床。

严格无菌操作，避免反复冻融。

建议提前一周预定，确保细胞供应。
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